背景^[1-3]

核固红染色液是组织切片染色中常用的复染液，染色后细胞核呈红色。染色液可重复使用多次，但染色效果会逐渐降低。 核固红(Nuclear fast red)又称细胞核坚牢红，分子式为C14H8NNaO7S，分子量为357.27，微红至深棕色粉末，溶于乙醇和水。核固红染色液是组织切片染色中常用的复染液，染色后细胞核呈红色。可以用于测定血清中钙的试剂，或者网状结缔组织的细胞核染色。可将细胞核染为红色。NobleRyder普鲁士蓝染色用于显示局部组织内的各种出血性病变，常见于吞噬细胞内，可以很好地区分含铁血黄素与其他色素。该染色液稳定性好、可以长期保存、不易产生沉淀、应用范围广，可以进行复染。该染色液的复染液采用核固红，是最经典、最常用的复染液。

核固红染色液使用方法：

1、切片脱东曹哑光粉蜡至水，可进行其他染色，染色后蒸馏水洗2-5min。 2、将组织切片浸入核固红染色液，也可以直接滴加到样本上染色5-10分钟(浅染细胞核)，染色时间可根据染色深度做相应调整。 3、自来水中冲洗去除多余的染色液。 4、常规脱水透明，中性树胶封固。

应用^[4][5]

用于miR-9下调CXCR4抑制鼻咽癌增殖、侵袭和转移的作用及机制研究

microRNA分子是一类非编码小RNA,通过和靶基因3-UTR区结合抑制靶基因的转录或翻译,而其中的miR-9分子除参与胚胎神经发育、糖尿病和维护心肌功能外,还作为细胞增殖和分化的主控基因,参与Burkitt淋巴瘤、非霍奇金B细胞淋巴瘤、卵巢癌、胃癌、子宫内膜癌等恶性肿瘤的发生和转移,但miR-9究竟是抑癌基因还是癌基因因组织类型不同尚无定论,且在鼻咽癌甚至其他头颈部肿瘤miR-9的表达及功能研究尚无报道。 趋化因子受体-4(chemine receptor-4,CXCR4)是目前研究较为深入的趋化因子受体,文献报道CXCR4在多种恶性肿瘤的发生发展和磷酸二氢钾转移中起重要作用,且与鼻咽癌的转移和预后密切相关。研究miR-9在慢性鼻咽炎组织和不同转移潜能的鼻咽癌组织、永生化鼻咽上皮细胞NP69和鼻咽癌细胞中的表达情况；通过5-AZA和TSA处理C666-1细胞后检测miR-9的表达变化和相应编码基因的甲基化状态变化,进而研究miR-9在鼻咽癌中表达失调是否与相应的编码基因启动子区CpG岛DNA甲基化相关,明确miR-9表达失调的分子机制。通过筛选miR-9过表达的C666-1细胞和体内外功能实验,明确miR-9对鼻咽癌细胞增殖、迁移、侵袭和转移的影响；通过构建和miR-9结合的CXCR4 3’-UTR双荧光报告质粒及上述体内外功能实验,探讨miR-9和CXCR4之间是否存在直接的靶向调控关系,miR-9能否部分逆转CXCR4在鼻咽癌中的生物学功能。石蜡组织和细胞爬片经组织脱蜡和水化(4%多聚甲醛固定)、胰酶消化(细胞透化)、预杂交、杂交、封闭、抗地高辛标记的一抗(1：1000)4℃孵育过夜、BCIP/NBT缓冲液洗涤、BCIP/NBT染色、核固红复染、封片等步骤后,显微镜下观察染色结果,并进行结果判读,判定标准同免疫组化结果的判读。

参考文献

[1]MicroRNA-9 Reveals Regional Diversity of Neural Progenitors along the Anterior-Posterior Axis[J].Boyan Bonev,Angela Pisco,Nancy Papalopulu.Developmental Cell.2011(1)

[2]Methylation of HPV16 genome CpG sites is associated with cervix precancer and cancer[J].Chang Sun,Laura L.Reimers,Robert D.Burk.Gynecologic Oncology.2011(1)

[3]MicroRNA-26b is underexpressed in human breast cancer and induces cell apoptosis by targeting SLC7A11[J].Xiao-Xiao Liu,Xiao-Jun Li,Bo Zhang,Yong-Jun Liang,Ci-Xiang Zhou,Dan-Xia Cao,Ming He,Guo-Qiang Chen,Jian-Rong He,Qian Zhao.FEBS Letters.2011(9)

[4]Restoration of miR-517a expression induces cell apoptosis in bladdercancer cell lines[J].Takayuki Yoshitomi,Kazumori Kawakami,Hideki Enokida,Takeshi Chiyomaru,Ichiro Kagara,Shuichi Tatarano,Hirofumi Yoshino,Hiroshi Arimura,Kenryu Nishiyama,Naohiko Seki,Masayuki Nakagawa.Oncology Reports.2011(6)

[5]罗花南.miR-9下调CXCR4抑制鼻咽癌增殖、侵袭和转移的作用及机制研究[D].南方医科大学,2011.