背景^[1-3]

黑色素脂褐素染色液(尼罗蓝法)主要由尼罗蓝、酸等组成,利用尼罗蓝显示黑色素和脂褐素，该染色液可能对部分样本染色效果不佳，但该法操作简单。

使用方法:

1、将实验切片及对照切片入蒸馏水清洗。

2、浸入尼罗蓝雅宝染色液浸染20min。

3、蒸馏水洗4～5次。

4、水性封固液(如甘油明胶)封固。

注意事项：

1、该染色方法对部分样本染色效果不佳。

2、冰冻切片染色时，甘油三酯、胆固醇酯、类固醇等中性脂类染成红色或粉红色，脂肪酸、磷脂等酸性脂肪染成蓝色。黑色素属于非血源性内生色素，是一组颜色从浅棕色到黑色的色素。这种色素通常出现在皮肤、眼睛、大脑的黑质和毛囊中。黑色素有一个显著的物理性质，即完全不溶解于大多数有机溶剂——几乎可以肯定是由于黑素体中已形成的黑色素可与蛋白质紧密结合。黑色素另一个物理性质是能够被强氧化剂漂白，尽管这个过程是缓慢的。在病理情况下，这种色素也可出现在良性痣细胞瘤中和恶性黑色素瘤中。脂褐素是具有颗粒状的褐黄色色素，由含有脂肪的残存物和溶酶体消化物组成，被认为是由脂质和脂蛋白氧化产生的。脂褐素氧化过程是缓慢的、逐步发生的，因此色素会呈现出不同的染色反应、不同的颜色，形状和大小也变化不一。脂褐素可见于肝脏、肾脏、心肌、肾上腺、神经细胞与神经节细胞等，多分布在细胞核周围。

应用^[4][5]

用于牛磺酸对大鼠视网膜光化学损伤的防护作用及其机理研究

在日常生活和特定的工作环境中,持续强光照射容易导致视网膜光损伤。视网膜光损伤主要分为热损伤、机械损伤和光化学损伤(Photochemical damage)三大类,其中光化学损伤最为常见。该类损伤早期出现视网膜功能减退,内外节段(Retina outer/inner segment,ROS/RIS)排列紊乱甚至断裂消失,感光细胞变性、丢失,外核层(Outer nuclear layer,ONL)变薄,损伤后期视网膜内层神经元变性坏死,视觉功能严重受损甚至失明。

近年研究发现,在光致视网膜损伤和遗传性视网膜色素变性疾病中,凋亡(Apoptosis)是感光细胞丢失的主要机制,按凋亡分期分为以下几个阶段:(1)诱导期:主要与视网膜色素(黑色素和脂褐素),视紫红质,视黄醛等吸收光子有关;(2)死亡信号转导早期:感光细胞内钙离子超载、线粒体损伤、脂质过氧化以及活性氧自由基启动凋亡信号转导;(3)死亡信号转导后期:早期凋亡信号进一步激活AP-1(Activator protein),其c-fos亚单位被认为是必需的凋亡信号转导因子:核转录因子(Nuclear factor-kappaB,NFκB)激活后促进抗氧化基因转录,持续光照后其活性下调,促进凋亡信号转导。(4)终止期:Caspase家族、钙蛋白丙烯酸树脂酶等参与了凋亡过程,其中Caspase-1较特异。针对致伤环节,发现钙通道阻滞剂、AP-1阻断剂(地塞米松)、抗氧化剂以及自由基清除剂,神经营养因子等均能有效保护视网膜,但部分防护剂有一定的毒副作用,或给药方式复杂,因此寻找一种安全、方便、有效的防护物质很有必要。

参考文献

[1]Molecular mechanisms of light-induced photoreceptor apoptosis and neuroprotection for retinal degeneration.Wenzel A,Grimm C,Samardzija M,et al.Progress in Retinal and Eye Research.2005

[2]The protective effect of ascorbate in retinal light damage of rats.Organisciak D T,Wang H M.Li Z Y,et al.Investigative Ophthalmology.1985

[3]Inhibition of interleukin 1beta converting enzyme family proteases reduces ischemic and excitotoxic neuronal damage.Hara H,Friedlander RM,Gagliardini V,et al.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America.1997

[4]Low taurine,gamma aminobutyric acid and camosine in plasma of diabetic pregnant rats:consequences for the offspring.Aerts L,Van Assche F A.Journal of Perinatal Medicine.2001

[5]陈卡.牛磺酸对大鼠视网膜光化学损伤的防护作用及其机理研究[D].第三军医大学,2005.