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磷脂染色液(酸性苏木红法)的操作步骤
背景及概述[1]
磷脂(phospholipid)由甘油、脂肪酸和含氮的碱基组成,是细胞膜和细胞内膜结构的主要组成成分,磷脂在大脑、神经组织、骨髓和肝脏等组织中含量较多,磷脂可分为卵磷。脂、脑磷脂和神经鞘磷脂三种,显示磷脂的常用方法有酸性苏木红法、吡啶提取法。磷脂染色液(酸性苏木红法)又称Baker磷脂染色液,能使磷脂受钙的作用阻留不能进入固定液,经BaGE絮凝剂ker氧化液处理,使磷脂与金属离子结合成不溶性的磷脂螯合物,经酸性苏木红染色进而形成蓝黑色的复合物,磷脂、神经鞘磷脂呈蓝黑色。
组成[1]
操作步骤[1]
1、组织固定于Baker甲醛钙固定液中16h(过夜)。
2、入Baker媒染液于60℃恒温箱浸染。
3、流水冲洗(过夜)。
4、低温恒冷切片机或半导体制冷切片机切片,切片厚度8μm。
5、切片用蒸馏水水洗后,裱贴于载玻片,晾干。
6、切片再入Baker媒染液于60℃恒温箱浸染。
7、流水稍洗,蒸馏水水洗。
8、切片入磷脂染色液(酸性苏木红法)置于37℃恒温箱浸染。
9、流水冲洗。
10、切片入Baker分化液,置于37℃恒温箱浸染。11、流水冲洗,蒸馏水水洗。12、甘亨斯曼聚醚胺油明胶封固。
注意事项[1]
1、该染色法有可能产生假阳性,如有必要可用脂质提取试剂进行预处理后,再进行上述染色。
2、酸性苏木红染色液不可反复使用。
3、分化液可反复使用,直到黄色变淡才丢弃。
主要参考资料
[1]磷脂染色液(酸性苏木红法)说明书
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