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网状纤维染色液(改良GOMORI银氨法)的原理和操作步骤
背景及概述[1]
网状纤维(Reticularfiber)是网状结缔组织内的一种纤维,由网状细胞所产生,直径多在0.2~1.0μm,有韧性而没有弹性。网状纤维的染色方法很多,但染色原理基本一致,大都采用氨银浸法。改良Gomori网状纤维染色原理是利用氨银液易被组织吸附与组织的蛋白质结合,经甲醛还原成黑色或棕黑色的金属银,沉积于组织内及其表面。传统方法中还原后先采用氯化金调色,再用硫代硫酸钠溶液洗去组织上未还原的银盐,本改良法省略该步骤,使网状纤维对比得更清晰。
网状纤维染色液(改良Gomori银氨法)主要经过氧化、漂白、媒染、浸银、还原步骤,与改良Gordon-Sweets法不同之处在于后者采用酸性氧化剂和核固红复染液。冰冻切片、低温切片和火棉胶切片均可用于网状纤维染色,各种固定液均可采用,重金属汞盐或锇盐固定液偶尔会产生一些非特异石油树脂的用途性银背景。网状纤维染色液(改良Gomori银氨法)常用于鉴别肿瘤的性质和来源、癌与肉瘤、淋巴肉瘤与网状细胞肉瘤、血管内皮瘤与血管外皮瘤、骨尤文瘤与骨网状细胞肉瘤、脑膜瘤与星形细胞瘤、恶性神经鞘瘤及早期浸润癌等。
操作步骤
1、组织固定于10%福尔马林固定液,常规脱水包埋。
2、切片厚4μm,常规脱蜡至水。
3、把切片平置在染色架上,滴加Gomori氧化剂,氧化5min。
4、稍水洗
5、入草酸溶液漂白1~2min。
6、流水冲洗2min,蒸馏水稍洗。
7、硫酸铁铵溶液媒染5min。
8、稍水洗,蒸馏水稍洗。
9、滴加网状纤维染色液(改良Gomori银氨法)染色3min。
10、蒸馏水稍洗。
11、Gomori还原剂还原1min。
12、流水冲洗10min。
13、常规脱饱和聚酯水透明,中性树胶封固。
注意事项
1、玻璃器皿必须用洗涤液浸泡1天,自来水冲洗干净,蒸馏水冲洗2次。
2、10%福尔马林固定液是较为适合的固定液,不宜采用含汞的固定剂如Zenker液,否则易导致切片非特异性沉淀。
3、网状纤维染色液(改良Gomori银氨法)不太稳定,对光的敏感性强,应4℃避免保存,恢复至室温后使用。
主要参考资料
[1] 网状纤维染色液(改良Gomori银氨法)操作说明
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