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螺旋体染色液(LEVADITI硝酸银法)的产品组成和操作步骤
背景及概述[1]
螺旋体(spirochaeta)是一类细长、弯曲呈螺旋状、运动活波的原核细胞型微生物,具有细菌的基本结构,细胞壁有脂多糖和壁酸。螺旋体分为密螺旋体(如梅毒螺旋体)、疏螺旋体(如回归热螺旋体)、钩端螺旋体等。梅毒螺旋体有8~12均匀的螺旋,两端尖直;钩端螺旋体细长,数目较多而且细密,一端或两端弯曲呈钩状,菌体亦常屈曲呈C形或S形。梅毒螺旋体和钩端螺旋体可用镀银法进行显色,如Levaditi法、Warthin-Starry法。螺旋体染色液(Levaditi硝酸银法)是利用螺旋体具有的嗜银性,在一定条件下螺旋体可从银液中吸附银离子,经还原液处理后,螺旋体内吸附的银离子被还原为黑色的金属银而显色。该染色液主要用于显示梅毒螺旋体,亦可显示钩端螺旋体,但较少显示热回归螺旋体,对肝脏梅毒树胶肿和肝脏钩端螺旋体具有鉴别作用。
产品组成[1]
操作步骤[1]
1、组织切片厚度1~2mm为佳,置于10%福尔马林中固定2~4天。
2、流水冲洗过夜。
3、95%乙醇浸泡24h。
4、蒸馏水浸洗并不停摇动,直至组织下沉为止。
5、更换新的蒸馏水浸洗10min。
6、入硝酸银溶液,加盖置于37℃恒温箱孵育1天,更换新的硝酸银溶液,继续37℃恒温箱孵育2天。
7、蒸馏水浸洗3次,每次10min。
8、入配制好的Levaditi还原液,加盖室温避光孵育2天。
9、蒸馏水浸洗3次,每次2min。
10、常规脱水透明,浸蜡包埋。
11、切片厚色素炭黑度6~8μm,贴片,烤干。
12、二甲苯脱蜡2次,中性树胶封固。
染色结果[1]
梅毒螺旋体、钩端螺旋体
黑色或棕黑色
注意事项[1]
1、实验所用器皿需用硫酸洗液浸泡,洗干净。
2、步骤4、5的洗片气相二氧化硅步骤很有必要,一定要把组织中的甲醛和乙醇彻底清除,否则易导致组织内银盐的沉淀
3、某些细菌和真菌菌丝也会被该染液染成黑色,应注意螺线体为螺旋状形态,并加以鉴别。
主要参考资料
[1]螺旋体染色液(LEVADITI硝酸银法)操作说明
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