- 吡咯烷酮羧酸钠 L-吡咯烷
- 水性油墨中,加入蜡乳液与
- 农药原料中常用的三氯乙酸
- 分散剂在涂料中的八大作用
- 二氯乙酸是怎么制成的?二
- 水性涂料选择分散剂该注意
- 一篇文章让你读懂什么是氯
- 抗静电剂在涂料工业中的应
- 什么是过乙酸?过乙酸的用
- 知道增稠剂与流平剂之间的
- 一文了解乙酸酐在不同行业
- ”硬脂酸、PE蜡和石蜡“在
- 一文读懂冰乙酸!冰乙酸的
- 膨润土改性及其在环境治理
- 橡塑行业常用的溶剂,乙酸
- 工业防锈水性防锈剂研究与
- 甲酸在印染工业中的应用,
- 乳化剂np10的性能与应用
- 钨酸的作用?钨酸的性质及
- 一文读懂消光粉的三大用途
- 皮肤碰到氟硅酸了怎么办?
- 关于硅酸你了解多少?硅酸
- 神奇!氯磺酸的作用范围竟
- 胶粘剂行业竞争激烈,水性
- 高氯酸你了解多少?高氯酸
- 偶联剂和交联剂、相容剂在
- 氢溴酸的性能及用途介绍
- 无水氢氟酸有什么作用?无
- 氢氟酸你了解多少?氢氟酸
- 消泡剂在混凝土中的应用
抗体亲和纯化洗脱液的应用
概述[1]
抗体是机体对体内存在的外来分子、微生物的抗原物质刺激,由B淋巴细胞分化的浆细胞产生的一类糖蛋白,可以是以与膜结合的形式作为抗原受体结合于B细胞表面;也可以是以分泌的形式存在于血液或体液中,作为特异性体液免疫的效应分子,参与清除抗原过程中的分子间相互作用。
抗体作为一种特殊的蛋白质分子,近年来作为药物、塑料抗静电剂体外诊断试剂、免疫亲和层析配基、药物载体工具等得到了长足的发展,同时抗体也在医学、生命科学、生物工程等领域有着广泛的应用。
缓冲液的配制[2]
平衡缓冲液:pH 7.4, 20 mmol/L磷酸盐缓冲液 (PBS, 分别含0.15、0.25、0.3、0.75 mol/LNaCl) 。洗脱缓冲液:pH 2.8, 0.1 mol/L甘氨酸缓冲液。中和缓冲液:pH 9.0, 1 mol/L Tris-HCl缓冲液。
一些纯化载量较少的抗体可适当提高需平衡缓冲液中的盐浓度 (可达3 mol亨斯迈金属络合染料/L) 和pH值 (可达pH 8.2) , 以提高抗体和介质的吸附力。但是, 有时高pH会增加杂蛋白吸附, 使用时应根据实际情况调节。
以上缓冲液使用前均需经0.45μm滤膜过滤。
应用[2]
(a) 装柱:偶联了重组蛋白A的Sepharose4FF填料装柱后, 用洗脱缓冲液洗3~5个柱床体积洗掉乙醇和杂质, 用平衡缓冲液流洗5~10个柱床体积平衡柱。
(b) 上样:将含免疫抗体IgG的兔血清样品上柱, 均匀上样, 可将流出液反复上样, 以更好地结合IgG (样品先用平衡缓冲液稀释5~10倍, 以保证样品液的pH和平衡缓冲液接近) 。
(c) 洗涤:用平衡缓冲液再洗5~10个柱床体积, 直至基线趋于平缓。
(d) 洗脱:分别以相对快速和慢速加入洗脱缓冲液, pH降至约3.0, IgG从填料上洗脱下来, 立即用上述中和缓冲液中和洗脱液至pH为中性, 防止洗脱缓冲液的酸性环境引起抗体失活。
参考文献
[1] 纳米抗体用于亲和纯化传统抗体的研究
[2] 蛋白A的固定及在抗体亲和纯化中的应用.唐秀
【版权声明】秉承互联网开放、包容的精神,凯茵化工欢迎各方(自)媒体、机构转载、引用我们原创内容,但要注明来源凯茵化工;同时,我们倡导尊重与保护知识产权,如发现本站文章存在版权问题,请将版权疑问、授权证明、版权证明、联系方式等,发邮件至 app@shkingchem.com,我们将第一时间核实、处理,感谢您的配合。
相关产品
【版权声明】秉承互联网开放、包容的精神,凯茵化工欢迎各方(自)媒体、机构转载、引用我们原创内容,但要注明来源凯茵化工;同时,我们倡导尊重与保护知识产权,如发现本站文章存在版权问题,请将版权疑问、授权证明、版权证明、联系方式等,发邮件至 app@shkingchem.com,我们将第一时间核实、处理,感谢您的配合。