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卵磷脂的纯化和纯度鉴定
背景及概述[1]
卵磷脂是磷脂的主要组成成分。磷脂(Phospholipid),也称磷脂类、磷脂质,是一类含磷酸根脂质的总称,属于复 合脂质。磷脂在植物种子、动物脏器、血液、卵巢、蛋黄及细菌中与油脂并存,是生物细胞构 成的必需物质,也是生命的基础物质之一。
一般磷脂组成成分包括:卵磷脂、脑磷脂、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油和磷脂酰肌 醇。其中,卵磷脂是磷脂的主要组成成分,同时具有亲水性磷酸脂酪基、胆碱或胆胺等(极性 基团)和疏水性脂肪酸基(非极性基团),因此卵磷脂是一种两性表面活性剂。具有分散、润 湿、溶解、消泡等作用,在营养和保健方面也起着非常重要的作用,能预防和治疗高胆固醇 和高脂血症,缓解糖尿病的病情等功能,因此,卵磷脂是目前公认的最具有生物学活性的磷 脂,在食品、医药、化妆品和饲料及其它工业部门都有着广泛的应用。
纯度鉴定[1]
(1)称取500mg卵磷脂样品,用氯仿溶解并定容至100mL,配制成5mg/mL的溶液;
(2)将上述卵磷脂溶液点样于距一矩形薄层层析板底端1.0cm处,使点样下方的薄层层析与展开剂液面接触,当展开剂上缘距离薄层层析板顶端1.3cm时立即取出薄层层析板,待薄层层析板上展开剂凉干后,再将薄层层析板完全浸泡于显色剂中,然后取出;
(3)防老剂4020可观察至薄层层析板上的卵磷脂、脂肪酸与甘油酯、溶血卵磷脂的显色斑点分别是黄色、白色、乳黄色,将薄层层析板扫描后测量出其面积分别为36mm2、4mm2和4mm2;
(4)计算:卵磷脂的纯度。
纯化方法[2]
一种硅胶柱层析法分离纯化卵磷脂的方法,
(1)取30g匀浆后的鱼卵,丙酮与鱼卵以1:5的pvc复合稳定剂料液比浸提35min,抽滤后滤饼用90% 的乙醇,在料液比1:5,提取温度30℃的条件下,超声辅助萃取15min,超声波功率为300w,脉 冲间隔2s,提取1次,抽滤;
(2)浓缩干燥:将乙醇提取液经40℃下减压浓缩后,置于45℃真空干燥得到粗磷脂 2.1g;
(3)分别将2.1g粗磷脂溶于异丙醇,氯仿和95%乙醇中,以2mL/min流速倒入硅胶柱 中,分别采用三种洗脱体系,包括异丙醇-甲醇溶液(1:1),氯仿-甲醇(1:1)和95%乙醇。用 TLC板检测样品的洗脱顺序。通过TLC分析,把与标准品卵磷脂有相同R值的PC馏分收集在一 起,减压浓缩至膏状,真空干燥得到的卵磷脂的纯度分别为:92%,93.12%,87.22%;说明氯 仿-甲醇体系洗脱效果最好,但是鉴于氯仿毒性较大,不宜用于卵磷脂的纯化。综合,选择异丙醇-甲醇洗脱体系为最佳洗脱条件。
参考文献
[1] [中国发明,中国发明授权] CN201110003383.4 一种鉴别卵磷脂纯度的方法
[2] [中国发明,中国发明授权] CN201410501211.3 一种硅胶柱层析法分离纯化鱼卵中卵磷脂的方法
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