背景^[1-3]

3-磷酸甘油醛脱氢酶(兔来源免疫组化用抗体)是以兔为宿主制备的3-磷酸甘油醛脱氢酶单克隆抗体蛋白。甘油醛-3-磷酸脱氢酶（Glyceraldehyde 3 phosphate dehydrogenase，GAPDH）是糖酵解（glycolysis）过程中的关键酶。

除了在胞质中作为糖酵解的酶以外，有证据表明哺乳动物细胞中的GAPDH参与了多种胞内生化过程，包括膜融合（membrane fusion）、微管成束（microtubule bundling）、磷酸转移酶（phosphotransferase）激活、核内RNA出核、DNA复制与DNA修复。一些生理因素，诸如低氧（hypoxia）和尿糖（diabetes），可以增加GAPDH在特定细胞中的表达。GAPDH存在于几乎所有的组织中，以高水平持续表达。GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30－40kDa的亚基组GAPDH蛋白几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参,是很好的内参抗体。GAPDH作为管家基因在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的。在实验中，可能存在总蛋白浓度测定不准确；或者蛋白质样品在电泳前上样时产生的样品间的操作误差；这油墨附着力促进剂些误差需要通过测定每个样品中实际转到膜上的GAPDH的含量来进行校正，所以一般的western实验都需要进行内参设置。具体校正的方法就是将每个样品测得的目的蛋白含量与本样品的GAPDH含量相除，得到每个样品目的蛋白的相对含量。然后才进行样品与样品之间的比较。

应用^[4][5]

用于甘油醛3-磷酸脱氢酶的高效制备及其在原核、真核生物中的应用研究

甘油醛3-磷酸脱氢酶(glyceraldehydes3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)是糖酵解反应的关键酶，为生物体的各种生命活动提供能量。该酶基因为看家基因，一般情况下在组织和细胞中高水平表达，可被用作RT-PCR、Westernt Blot等试验的内参。近年来甘油醛3-磷酸脱氢酶的新功能也越来越受到人们的关注，如：激活自身转录、启动细胞凋亡、调控糖酵解和戊糖磷酸途径间的转化等。本研究采用大肠杆菌原核表达系统来制备甘油醛3-磷酸脱氢酶，分别构建了pET28b-GAPDH、TAT-pET28b-GAPDH重组载体，比较了蛋白转导肽TAT标签的加入对甘油醛3-磷酸脱氢酶表达的影响。结果显示，通过蛋白转导肽TAT标签的加入，促进了甘油醛3-磷酸脱氢酶的表达，且所表达的蛋白在体外具有重要酶活。

本研究还分别对原核生物（大肠杆菌的不同菌株HB101、OP50、BL21、DH5α），真核生物（酵母、秀丽线虫、大鼠、小鼠）正常培养条件和不同处理条件（诱导剂不同浓度和处理时间、百草枯和亚硫酸盐不同浓度和时间处理）下内源性甘油醛3-磷酸脱氢进行了鉴定，此外本研究还通过原核表达技术比较了内源性和外源性甘油醛3-磷酸脱氢酶的表达量。结果表明，不论内源性和外源性甘油醛3-磷酸脱氢酶，其表达均保持相对稳定，基本不受影响，因此在原核和真核生物中甘油醛3-磷酸脱防老剂氢酶可作为通用的内标蛋白。

参考文献

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[2]Identification of suitable reference genes for measurement of gene expression in human cervical tissues[J].Yuanming Shen,Yang Li,Feng Ye,Fenfen Wang,Weiguo Lu,Xing Xie.Analytical Biochemistry.2010(2)

[3]A novel method for promoting heterologous protein expression in Escherichia coli by fusion with the HIV-1 TAT core domain[J].Yonghong Wu,Changhong Ren,Yan Gao,Bing Hou,Tingfang Chen,Chenggang Zhang.Amino Acids.2010(3)

[4]Effect of naloxone on the induction of immediately early genes following oxygen-and glucose-deprivation in PC12 cells[J].Hsueh-Meei Huang,Jean-Yuan Yu,Hsio-Chung Ou,Kee Ching Jeng.Neuroscience Letters.2008(2)

[5]张晓.甘油醛3-磷酸脱氢酶的高效制备及其在原核、真核生物中的应用[D].西北农林科技大学,2012.