背景^[1-3]

6磷酸果糖激酶2抗体是可以特异性结合6磷酸果糖激酶2的免疫蛋白。6磷酸果糖激酶2抗体是将6磷酸果糖激酶2注射到无菌动物体内进行系统免疫后在其血清中纯化制得的高纯度免疫蛋白。PFKFB2（6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶2）编码的蛋白质参与果糖-2,6-二磷酸果糖的合成和降解，果糖-2,6-二磷酸果糖是控制真核生物中糖酵解的调控分子。编码的蛋白质具有催化果糖-2,6-双磷酸酯合成的6-磷酸果糖-2-激酶活性和催化果糖-2,6-双磷酸酯降解的果糖-2,6-双磷酸酶活性。

该蛋白调节心脏中的果糖-2,6-二磷酸水平，而由不同基因编码的相关酶调节肝脏和肌肉中的果糖-2,6-二磷酸水平。该酶起同二聚体的作用。对于PFKFB2，已经发现了编码两个不同同工型的两个转录物变体。6-磷酸果糖激酶-2,也就是PFK-2催化6-磷酸果糖与Mg2+ATP合成2,6-双磷酸果糖就是说在6-磷酸果糖的第二位碳原子上加一个磷酸基团合成2,6-双磷酸果糖,这个磷酸基团来自于对ATP的水解.这个酶促反应要在Mg2+存在的情况下才能顺利进行。6-磷酸果糖激酶一2和果糖二磷酸酶一2泣丙神酸的活性共存于一个酌蛋白.上,具有2个分开的催化中心,是一和双功能酶。此酶以共价修饰方式调芍酸活性。膜高f糖素可通辻cAMP-蛋白激酶A信号通路使6-磷酸果糖激酸t2/果糖二磷酸酸一2爰生磷酸化,磷酸化后6-磷酸果糖激酸一2活性降低,而其対座的果糖二碑酸酶-2活性升高、糖酵解殱弱,糖昇生増加。碑蛋白磷酸酶可将6-硝酸果糖激酶-2/果糖.ニ磷酸酸-2爰生去硝酸化,6-磷酸果糖激酸一2去磷酸化后活性増高,而果糖ニ硝酸酶-2活性降低。

应用^[4][5]

用于亲和层析法纯化磷酸激酶的研究

磷酸激酶(kinase)是一类催化以ATP为供体的磷酸基转移反应的酶，它们在药物生产、临床应用以及抗癌药物的研究等方面都具有重要的意义。本文开展了采用亲和层析方法对己糖激酶(HK，EC 2.7.1.1)分离纯化工艺的研究，通过亲和层析剂制备工艺的确定和亲和柱层析法分离纯化工艺的优化，获到了一条较佳的磷酸激酶纯化工艺路线。

结果表明，该磷酸激酶亲和层析剂的制备成本低，合成工艺简单，分离纯化工艺效果良好，克服了一般亲和层析剂制备过程中费时、有毒性等缺点，对制备大量高纯度的磷酸激酶具有良好的应用前景。啤酒酵母经过预处理，冻融法破碎细胞后得到酶粗提液，经硫酸铵分步盐析(30％～70％)，酶粗提液中HK的比活提高了3.3倍，酶活回收率为70.9％。通过对配基、接臂、载体、活化方法等方面的选择，确定了以纸纤维为载体、环氧氯丙烷为活化剂、1，6-己二胺为间隔臂、ATP为配基制备磷酸激酶亲和层析剂的工艺过程。在此基础上对主要工艺参数进行优化，确定了最佳反应条件为：活化剂用量1ml／(g载体)，接臂pH 6.0，再活化pH 6.0，偶联温度35℃，偶联初始ATP浓度4.0mmol／L，偶联pH 6.0，偶联时间4h。

参考文献

[环保热熔胶1]Chelated mercury as a ligand in immobilized metal ion affinity chromatography of protein.Lina Gelunaite,Virginijus Luksa,et,al.Journal of Chromatography A.2001

[2]New family of glutathionyl-biomimetic ligands for affinity Chromatography of glutathiong-recogising enzymes.S.C.Melissis,et,al.Journal of Chromatography A.2001

[3]Characterization of m二丙二醇丁醚etal affinity of green fluorescent Protein and its purification through salt promoted,immobilized metal affinity chromatography.Yi Li,Ananol Agrawal,et,al.Journal of Chromatography A.2001

[4]Interaction of Cibacron Blue with polymers:implications for polymer-shielded dye-affinity chromatography of phosphofructokinase from baker’s yeast.Igor Yu.Journal of Chromatography A.1994

[5]王玉姣.亲和层析法纯化磷酸激酶的研究[D].浙江工业大学,2006.