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人抗心磷脂抗体IGM(ACA-IGM)ELISA试剂盒的组成
人抗心磷脂抗体IGM(ACA-IGM)ELISA试剂盒概述[1][2]
人抗心磷脂抗体IGM(ACA-IGM)ELISA试剂盒采用双抗原夹心酶联免疫法(ELISA)测定标本中人抗心磷脂抗体IgM(ACA-IgM)。用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可与样品中抗心磷脂抗体IgM(ACA-IgM)相结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中人抗心磷脂抗体IgM(ACA-IgM)的存在与否。
人抗心磷脂抗体IGM(ACA-IGM)ELISA试剂盒样本处理及要求[1][2]
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用橡胶增塑剂PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反硬脂酸复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
主要参考文献
[1] 沈洪远;张健;胡志刚;叶燕。Sm3+标记抗心磷脂抗体IgM时间分辨荧光免疫分析法的建立。中国实验诊断学。
[2] 盛慧明;曹雅楠;孙兵;薛一峰;胡志刚。抗心磷脂抗体IgG和IgM双标记时间分辨荧光免疫分析法的建立和应用。上海医学。
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