背景^[1-3]

锌结合乙醇脱氢酶结构域蛋白2抗体是一类可以特异性结合锌结合乙醇脱氢酶结构域蛋白2的多克隆抗体，主要用于锌结合乙醇脱氢酶结构域蛋白2的体外检测。

锌结合乙醇脱氢酶结构域蛋白2抗体具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来，以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定量的研究。

锌结合乙醇脱氢酶结构域蛋白2

乙醇脱氢酶（Alcohol dehydrogenase，简称ADH）的系统名为：乙醇：辅酶I氧化还原酶（alcohol：NAD+oxidoreductase），大量存在于人和动物肝脏、植物及微生物细胞之中，是一种含锌金属酶，具有广泛的底物特异性。

乙醇脱氢酶够以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)为辅酶,催化伯醇和醛之间的可逆反应：CH3CH2OH+NAD+→CH3CHO+NADH+H+。在人和哺乳动物体内,乙醇脱氢酶与乙醛脱氢酶(ALDH)构成了乙醇脱氢酶系,参与体内乙醇代谢，是人和动物体内重要的代谢酶。

作为生物体内主要短链醇代谢的关键酶，它在很多生理过程中起着重要作用。它是一种广泛专一性的含锌金属酶。乙醇脱氢酶乙醇氧化体系是在肝脏中代谢酒精的一条主要途径。乙醇脱氢酶氧化体系包括醇脱氢酶(ADH)和醛脱氢酶(ALDH)。

应用^[4][5]

用于植物ADH基因家族的生物信息学分析及棉花Zn结合脱氢酶的克隆与原核表达研究

以陆地棉总RNA进行反转录合成的cDNA为模板进行PCR扩增,获得全长基因序列。ORF分析表明,序列中包含一个1305bp的OR对甲苯磺酸酐F,编码434个氨基酸。通过BLAST和多重序列比对,克隆的序列可能是一个锌结合脱氢酶家族蛋白的同源蛋白,将其命名为棉花锌结合脱氢酶蛋白（cotton zinc-binding dehydrogenase family protein）,将该基因命名为GhZBDH。

保守结构域分析表明,从氨基酸链的63位至433位,是进行能量制造与转化的第三类锌结合乙醇脱氢酶AdhC结构域,87至221位是ADHN结构域,269至394位是NAD（P）结合蛋白结构域。结构域预测的结果进一步暗示,这个蛋白质在一级结构上具有与其他物种ADH类似的构成状况,可能发挥着ADH功能。成功的将棉花锌结合脱氢酶基因构建到PQE-30载体之中,重组载体命名为pQE30-GhV3。

然后应用热激转化法将pQE30-GhV3重组载体转化入表达菌株M15中,进行诱导表达。表达研究证明,这个蛋白表达的最适合温度为37℃,最适IPTG浓度为0.1mmol/L,最适诱导时间为3小时。在37℃、0.1mmol/L浓度的IPTG条件下,诱导3小时,使用Ni-NTA凝胶亲和层析柱进行层析,电泳分离纯化产物。

参考文献

[1]In silico insight into two rice chromosomal regions associated with submergence tolerance and resistance to bacterial leaf blight and gall midge[J].Kameswara Rao Kottapalli,N.Sarla,Shoshi Kikuchi.Biotechnology Advances.2006(6)

[2]Regulation of disease resistance pathways by AP2/ERF transcription factors[J].Neal Gutterson,T Lynne Reuber.Current Opinion in Plant Biology.2004(4)

[3]Profiling ethylene-regulated gene expression in Arabidopsis thaliana by microarray analysis[J].Guang Van Zhong,Jacqueline K.Burns.Plant Molecular Biology.2003(1)

[4]Characteristics of Bacteria from Oilseed Rape in Relation to their Biocontrol Activity against Verticillium dahliae[J].Journal of Phytopathology.2001(2)

[5]石之光.植物ADH基因家族的生物信息学分析及棉花Zn结合脱氢酶的克隆与原核表达[D].贵州大学,2009.