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胰酶细胞消化液(含酚红)的应用
背景[1-3]
胰酶细胞消化液(含酚红)0.25%胰酶、0.02%EDTA和酚红,pH值为7.2-7.8。该消化液经过过滤除菌,可以直接用于培养细胞的消化,或者一些组织的消化。
贴壁细胞的消化:
1、吸去培养液,用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
2、加入少量胰酶细胞消化液,略盖过细胞即可,室温放置30秒至2分钟。不同的细胞消化时间有所不同。
3、显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化,或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来;此时吸除胰酶细胞消化液;加入含血清的完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
4、如果发现消化不足,则加入胰酶细胞消化液重新消化。
5、如果发现细胞消化时间过长,细胞已经有部分直氨基树脂接从培养器皿底部脱落,直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
组织的消化:不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
注意事项:
1、在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。
2、胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长,否则细胞铺板后生长状况会较差。
应用[4][5]
用于比较胰酶/EDTA两种消化液对携带水痘-带疱疹病毒的2BS消化效果分析研究
比较胰酶和EDTA两种消化液消化感染水痘-带状疱疹病毒的2BS细胞冻融后的病毒滴度(VT)。方法分别配制两常用抗氧剂种浓度的胰酶和EDTA:0.125%、0.25%的胰酶,0.01%、0.02%的EDTA各1000ml,按比例加入预先培养好的携带水痘-带疱疹病毒的等量2BS细胞中,消化后,用显微镜观察细胞形态,消化液离心、浓缩、冻融、检测并比较病毒滴度。
结果与0.125%、0.25%的胰酶、0.01%EDTA,0.25%的胰酶与0.02%的EDTA混合消化液相比,用0.02%的EDTA消化液消化感染水痘-带状疱疹病毒的2BS细胞,冻融后的病毒滴度提高了1.3~0.8个log值。结论用0.2%EDTA消化液消化的含有水痘病毒的细胞获得的病毒滴度最好。
参考文献
[1]Establishment and Maintenance of Human Embryonic Stem Cell Lines on Human Feeder Cells Derived from Uterine Endometrium under Serum-Free Condition1[J].Jung Bok Lee,Jeoung Eun Lee,Jong Hyuk Park,Sun Jong Kim,Moon Kyoo Kim,Sung Il Roh,Hyun Soo Yoon.Biology of Reproduction.2005(1)
[2]Wnt signalling inhibits neural differentiation of embryonic stem cells by controlling bone morphogenetic protein expression[J].Lorenz Haegele,Barbara Ingold,Heike Naumann,Ghazaleh Tabatabai,Birgit Ledermann,Sebastian Brandner.Molecular and Cellular Neuroscience.2003(3)
[3]Id proteins in development,cell cycle and cancer[J].Marianna B.Ruzinova,Robert Benezra.Trends in Cell Biology.2003(8)
[4]BMP Induction of Id Proteins Suppresses Differentiation and Sustains Embryonic Stem Cell Self-Renewal in Collaboration with STAT3[J].Qi-Long Ying,Jennifer Nichols,Ian Chambers,Austin Smith.Cell.2003(3)
[5]郝鹏博,谢秋红,杜岩,杨蕾蕾.比较胰酶/EDTA两种消化液对携带水痘-带疱疹病毒的2BS消化效果分析[J].中国实用医药,2011,6(21):60-61.
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