背景^[1-3]

单料乳糖蛋白胨培养液可用于细菌总数测定、纯培养及保存菌种，也可用于消毒效果测定；用于沙门氏菌培养（GB）。

原理：

蛋白胨、牛肉膏粉提供碳氮源及矿物质;乳糖是可发酵的糖类;氯化钠维持均衡的渗透压;溴甲酚紫为pH指示剂，酸性呈黄色，碱性呈紫色。

使用方法：

1、称取本品23g(单料)，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管或三角瓶，115℃高压灭菌20min，备用。作双料时除蒸馏水或去离子水外其余成分加倍。

2、(1)检验生活饮用水国标发酵法：各取100mL水样加到50mL三料乳糖蛋白胨培养液中，共2瓶;各取10mL水样加到5mL三料乳糖蛋白胨培养液中，共10管。

(2)检验生活饮用水卫生规范发酵法：取10mL水样接种到10mL双料乳糖蛋白胨培养液中，取1mL水样接种到单料乳糖蛋白胨培养液中，另取1mL水样注入到9mL灭菌生理盐水中，混匀后吸取1mL(即0.1mL水样)注入到10mL单料乳糖蛋白胨培养液中，每一稀释度共接种5管。对已处理过的出厂自来水，需经常检验或每天检验一次，可直接接种5份10mL双料培养基，每份接种10mL水样;检验水源水时，如污染较严重，应加大稀释度，可接种1，0.1，0.01mL甚至0.1，0.01，0.001。每个稀释度接种5管，每个水样接种15管。接种1mL以下水样时，必须做10倍递增稀释后，取1mL接种。每递增稀释一次，换用一支1mL灭菌分度吸管。

3)滤膜法：挑取可疑菌落接种到乳糖蛋白胨培养液中。

3、将接种管放入到培养箱中36±1℃培养24h。

4、观察结果。如所有乳糖蛋白胨培养管都不产气，则可报告为总大肠菌群阴性，如有产酸产气者，则要进行分离、证实试验。

应用^[4][5]

用于菌落总数和大肠菌群测试片的研究与评价研究

对比现有广泛应用的商品化测试片,采用覆膜-载体结构制备微生物测试片,通过基础培养基配方的改良、测试片材料的选择、以及测试片结构的优化,最终制备了菌落总数和大肠菌群测试片,并对测试片的性能进行了评价。

通过对不同配方培养基的性能比较,最终确定了菌落总数测试片和大肠菌群测试片所用培养基的配方。菌落总数测试片优化后的培养基配方为:葡萄糖1.25g/L、吐温80 0.025g/L、胰蛋白胨6.25g/L、酵母粉1.25g/L;大肠菌群测试片优化后的培养基配方为:酵母粉3g/L、乳糖5g/L、氯化钠7g/L、磷酸氢二钾3.4g/L、磷酸二氢钾1g/L、蛋白胨15g/L。

通过对不同测试片材料的性能验证、以及不同测试片结构的比较,最终确定了测试片的最佳制作方法:(1)根据优化结果配制培养基,加入显色剂,搅拌均匀,加入胶凝剂,同时人工搅拌或用磁力搅拌器搅拌培养基,使得胶凝剂能在培养液中混合均匀;

(2) 将上述复配含冷水可溶胶凝剂的培养基浸渍两种无纺布3min,使无纺布浸满培养基;0.45μm的尼龙滤膜浸渍上述不含胶凝剂的培养基;由下至上依次叠放浸渍了含冷水可溶胶培养基的银河牌薄层无纺布、厚层无纺布和滤膜,叠放完成后置于55℃烘箱干燥,干燥4-6h即得到载体结构;

(3) 将3mm厚的垫圈作为下层,载体结构作为中层,4.5mm厚度的垫圈作为上层,组合制得三层“夹心”结构,即为测试片主体结构;

(4) 将测试片主体结构粘合于有粘性的底板基材上,覆盖上厚度为0.6mm的PET覆盖片材,即完成测试片的制备;

(5)按照上述方法制作的简易装置放入铝箔包装袋中。辐照灭菌,辐照剂量为15KGy。通过与国标方法比较,验证了所制备测试片的性能。

参考文献

[1]Evaluation of a novel dry sheet culture method(Sanita-kun R)for rapid enumeration of yeasts and molds in foods[J].Hajime Teramura,Masashi Ushiyama,Hirokazu Ogihara.Journal of Microbiological Methods.2015

[2]Comparison of adenosine triphosphate,microbiological load,and residual protein as indicators for assessing the cleanliness of flexible gastrointestinal endoscopes[J].Ryo Fushimi,Masaki Takashina,Hideki Yoshikawa,Hiroyoshi Kobayashi,Takashi Okubo,Seizoh Nakata,Mitsuo Kaku.AJIC:American Journal of Infection Control.2光引发剂012

[3]A rapid method for the detection of representative coliforms in water samples:polymerase chain reaction-enzyme-linked immunosorbent assay(PCR-ELISA)[J].Jong-Tar Kuo,Chiu-Yu Cheng,Hsiao-Han Huang,Chia-Fen Tsao,Ying-Chien Chung.Journal of Industrial Microbiology&Biotechnology.2010(3)

[4]Comparison of results of 对甲苯磺酸酐ATP bioluminescence and traditional hygiene swabbing methods for the determination of surface cleanliness at a hospital kitchen[J].Hasan Aycicek,Utku Oguz,Koray Karci.International Journal of Hygiene and Environmental Health.2005(2)

[5]徐艺芮.菌落总数和大肠菌群测试片的研究与评价[D].天津科技大学,2017.