背景^[1-3]

甲苯胺蓝染色液(1%,硼酸盐法)是一种常用的人工合成染料,属于醌亚胺染料类,这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。甲苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类,帮助发色团对组织产生染色力,使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。另外，肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质，遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色，临床上经常用于肥大细胞染色。甲苯胺蓝染色液(Toluidine Blue,1%,硼酸盐法)由于硼酸盐缓冲液罗门哈斯呈强碱性，更利于组织细胞的着色。

使用方法

(一)肥大细胞染色 1、脱蜡至蒸馏水。 2、根据切片厚度和组织的不同，浸染于甲苯胺蓝染色液5～30min。 3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗3～5min。 4、(可选)0.5%冰乙酸分化，直到细胞核和颗粒清晰可见。 5、快速95%和无水乙醇脱水。 6、二甲苯透明，封固。 染色结果：肥大细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。

(二)软骨染色

1、石蜡切片入二甲苯2次，每次15min。 2、系列乙醇各1min。 3、自来水洗2min。 4、入Toluidine Blue O Stain，浸染10～15min。 5、自来水洗2min，滤纸吸干水分。 6、丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。 7、逐级乙醇脱水。 8、二甲苯透明，中性树胶封固。 染色结果：软骨、成骨细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。

应用^[4][5]

用于骨炎定对体外培养软骨细胞的影响研究

骨性关节炎是中老年人的常见疾患，主要病理特征是关节软骨的退变。关节软骨退变的原因尽管是多方面的，但软骨细胞的结构破坏和功能丧失在其中起着至关重要的作用。采取有效方法保护软骨细胞的结构、调节软骨细胞的功能是防止软骨退变的关键措施，是治疗骨性关节炎的正确途径。陈基长教授研制的中药骨炎定（GUYANDING，GYD）能减轻骨性关节炎的临床症状，改善关节功能。为了深入探讨其作用机理，采用软骨细胞培养技术观察其对软骨细胞代谢的影响。关节软骨细胞的分离和培养采用胶原酶Ⅱ分段酶消化法从三月龄大耳白兔的关节软骨中分离出软骨细胞并进行原代和传代培养。每日在倒置显微镜下观察细胞形态及其生长情况，并用甲苯胺蓝异染色法进行细胞表型鉴定。结果表明，软骨细胞形成单层的时间原代培养1周左右，传代培养约4-5天，细胞以圆形或上皮样细胞形态为主。甲苯胺蓝染色证实，细胞可合成蛋白多糖，异染反应主要集中在细胞集落样生长区，异染程度以原代培养最为显著。

参考文献

[1]NO at work.Schmidf HH,Walter V.Cell.1995

[2]Osteoarthritis chondrocytes die by apoptosis:a possible pathy for osteoarthritis pathology.Blanco FJ,Guitian R,Vazquez-Martul E,etal.Arthritis and Rheumatism.1998

[3]Differential use of alcian blue and tiluidine blue dyes for quantification and isolation of anionic glycoconjugates from cell culture:application to proteoglycans and a high-molecular-weight glycoprotein synthesized by articular chondrocytes.D.E.Terry,R.K.Chopra,J.Ovenden,et al.Analytical Biochemistry.2000

[4]Apoptosis in normal and osteoarthritis human art美国雅宝icular cartilage.F Heraud,A Heraud,M-Fharmand.Annals of the Rheumatic Diseases.2000

[5]杨运东.骨炎定对体外培养软骨细胞的影响[D].广州中医药大学,2001.