背景及概述^[1]

Hoechst 33342，也称bisBenzimide H 33342或HOE 33342，是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33342染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33342也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。Hoechst 33342的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33342和双链DNA结合后，最大激发波长为350nm，最大发射波长为461nm。本Hoechst 33342染色液为即用型，可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。

使用说明^[1]

1. 对于固定的细胞或组织：

a. 对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光水性氨基树脂染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33342染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33342染色。

b. 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 33342染色液，覆盖住样品即可；对于悬浮细胞，至少加入待染色样品3倍体积的染色液，混匀。室温放置3抗燃液压油-5分钟。

c. 吸除Hoechst 33342染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。

d. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。

2. 对于活细胞或组织：

a. 加入适当量Hoechst 33342染色液，必须充分覆盖住待染色的样品，通常对于六孔板一个孔需加入1ml染色液，对于96孔板一个孔需加入100微升染色液。

b. 在适宜于细胞培养的温度下培养20-30分钟。弃染色液，用PBS或培养液洗涤2-3次即可进行荧光检测。

注意事项^[1]

荧光染料都存在淬灭的问题，为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光衰减封片剂。建议染色后尽量当天完成检测，活细胞或组织染色后应立即观察。Hoechst 33342对人体有害，请注意适当防护。本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

主要参考资料

[1] Hoechst 33342 染色液（10ug/mL 即用型）使用说明