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甲基绿-派络宁染色液的染色原理和操作事项
背景及概述[1]
甲基绿、派洛宁为两种碱性染料。甲基绿分子有两个正电荷,易与双链DNA结合,使DNA显示绿色,派洛宁分子有一个正电荷,易与RNA结合,使RNA显示红色。甲基绿与吡罗红混合使用时,即称为甲基绿-派洛宁染色液(又名:甲基绿-吡罗红)。甲基绿-派洛宁染色液可以和免疫荧光染色或免疫组化染色配合使用。一方面可以在本甲基绿-派洛宁染色液染色后进行免疫荧光染色或其它染料的染色,另一方面也可以气相二氧化硅在免疫组化染色后再进行甲基绿-派洛宁复染。
原理[1]
甲基绿-派洛宁染色液染色的原理主要有两个方面:①染色与聚合程度有关,甲基绿与聚合程度高的DNA优先结合呈绿色,吡罗红优先与RNA结合呈红色;②甲基绿和吡罗红在水中电离后都带正电荷,但甲基绿碱性较吡罗氨基树脂红要强,甲基绿易与细胞核极性吸附而染色,吡罗红易与细胞质吸附结合。因此,pH过低甲基绿染色效果差;pH过高吡罗红染色效果不良。由染色原理可知,pH对染色结果有影响,考虑到不同材料细胞内pH可能存在差别,不同的材料对甲基绿-派洛宁染色液染色效果可能也存在差别。
注意事项[1]
1、尽量减少反复冻融的次数,以免失效。
2、在使用Trypsin-EDTAsolution过程中,要特别注意避免消化液被细菌污染。
3、Trypsin-EDTAsolution消化细胞时间不宜过长,否则细胞铺板后生长状况会较差。
4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
主要参考资料
[1] 影响吡罗红甲基绿染液染色效果的探究实验
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