背景^[1-3]

乳酸脱氢酶染色液(H型,四唑盐法)主要由四氮唑蓝孵育液、阴性对照组成。染色后酶活性部位呈蓝紫色沉淀。乳酸脱氢酶染色液(H型,四唑盐法)以乳酸为底物，在酶作用下脱氢，硝基蓝四唑(nitro BT)为受氢体，接受氢后被还原为甲噁，呈蓝紫色，用以代表H型乳酸脱氢酶(心型，即LDH1)的活性。LDH1孵育液中含有特殊的中间递氢体，使定位更准确，染色更清晰。 乳酸脱氢酶（LD或LDH）是一种糖酵解酶，主要作用是催化乳酸氧化为丙酮酸，将氢转移给NAD成为NADH。乳酸脱氢酶广泛存在于人体各组织中，最多见于心肌、骨骼肌和红细胞。乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LD/LDH）为含锌离子的金属蛋白，分子量为135~140kD，由H和M两种亚基组成，是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一，可催化丙酸与L-乳酸之间的还原与氧化反应，也可催化相关的a-酮酸。LDH广泛存在于人体组织中，以肾脏含量最高，其次是心肌和骨肌。红细胞内LDH约为正常血清的100倍。乳酸脱氢酶有5种同工酶，按其组织来源来说，LD1和LD2主要来源于心肌，临床常用的α-羧基丁酸脱氢酶（α-HBD）实际上就是LD1和LD2的活性之和；LD3主要来源于肺、脾；LD4和LD5（特别是LD5）主要来源于肝和骨骼肌。乳酸脱氢酶活性增高主要见于心肌梗死、急性或慢性肝炎乙醇、肝癌（尤其是转移性肝癌），其他可见于骨骼肌疾病、血液系统疾病、肺梗死、甲状腺功能减退、肾病综合征及晚期恶性肿瘤等。

乳酸脱氢酶染色液(H型,四唑盐法)操作步骤：

1.冰冻切片，无需固定。 2.切片人LDH1孵育液中，置于温箱，浸染。 3.蒸馏水冲洗。 4.甘油明胶封固。

应用^[4][5]

用于乳酸脱氢酶抑制剂Galloflavin，对子宫内膜癌细胞生物学特性影响及其机制的研究

子宫内膜癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，其发病率逐年升高，严重威胁着女性的生命健康。流行病学统计显示子宫内膜癌高危人群多为肥胖，患有糖尿病，高血压等代谢异常疾病的妇女，而糖代谢与子宫内膜癌的关系也日益得到重视。大多数肿瘤细胞利用糖酵解代谢途径产生的ATP，作为其能量提供的主要方式。靶向针对糖酵解途径抑制肿瘤生长，日益成为治疗肿瘤的新策略。通过分析GF对人子宫内膜癌细胞株的影响，探讨其作用的可能机制。方法MTT法观察终浓度为0μmol/L、0.01μmol/L、0.1μmol/L、10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、250μmol/L、500μmol/L GF分别作用于ECC-1、Ishikawa子宫内膜癌细胞株72h后，检测其对细胞增殖的抑制作用。以乳酸脱氢酶试剂盒检测GF干预后乳酸脱氢酶的活性的变化；以乳酸定量试剂盒检测GF干预后乳酸生成量变化；以ATP定量试剂盒检测GF干预后ATP生成量的变化；以2-NBDG检测GF干预后葡萄糖摄取量的变化；以DCFH-DA检测GF干预后细胞内活性氧物质产生量(ROS)的变化；以流式细胞仪、AnnexinV/FITC标记法检测细胞抗氧化剂的作用凋亡；以蛋白印迹法分析GF对BCL-2、MCL-1,Cleaved Caspase3蛋白表达的影响。同时行Annexin V-PI染色、流式细胞仪检测草氨酸盐对其凋亡的影响。结果GF抑制Ishikawa，ECC-1细胞的增殖并且随GF浓度增加，增殖抑制增加，呈剂量依赖性。GF处理细胞后乳酸脱氢酶的活性显著下降，乳酸产生量下降，ATP产生量下降，葡萄糖摄取量下降。活性氧物质产生量增加，Annexin V-PI染色、流式细胞仪检测均表现细胞凋亡比例逐渐增高，证实了GF具有诱导细胞凋亡的作用。

参考文献

[1]Galloflavin suppresses lactate dehydrogenase activity and causes MYC downregulation in Burkitt lymphoma cells through NAD/NADH-dependent inhibition of sirtuin-1[J].Marina Vettraino,Marcella Manerba,Marzia Govoni,Giuseppina Di Stefano.Anti-Cancer Drugs.2013(8) [2]Cancer statistics,2013[J].Rebecca Siegel,Deepa Naishadham,Ahmedin Jemal.CA:A Cancer Journal for Clinicians.2013(1) [3]Galloflavin,a new lactate dehydrogenase inhibitor,induces the death of human breast cancer cells with different glycolytic attitude by affecting distinct signaling pathways[J].F.Farabegoli,M.Vettraino,M.Manerba,L.Fiume,M.Roberti,G.Di Stefano.European Journal of Pharmaceutical Sciences.2012(4) [4]Anticancer Agents That Counteract Tumor Glycolysis[J].Carlotta Granchi,Filippo Minutolo.ChemMedChem.2012(8) [5]韩晓运.乳酸脱氢酶抑制剂Galloflavin，对子宫内膜癌细胞生物学特性影响及其机制的研究[D].济南大学,2014.