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组织蛋白裂解液的使用注意事项
概述[1]
异构烷烃采用各种表面活性剂和蛋白变性剂使样品快速充分破裂,从而释放蛋白质,内含作用强烈的蛋白酶抑制剂,从而保证了蛋白的完整。组织蛋白裂解液适用于动物组织蛋白质的变性提取,提取的蛋白质可以用于SDS-PAGE和Western blot 等实验。
南亚环氧树脂运输和保存条件
常温下运输,收到后将溶液A在4℃的冰箱冷藏室中保存,溶液B在-20℃环境中保存,保质期两年。
操作步骤[1]
1. 每100 mg固体组织置于培养皿中,手术剪剪碎成3 mm×3 mm左右的小块,用PBS 洗涤两次,离心取沉淀后加入1 mL 冷溶液A 和10 μL溶液B,4℃下玻璃匀浆器上下手动匀浆30-50次。或超声破碎细胞,每次30 sec,3~4次,每次间隔1 min,置于冰上冷却。均质或超声破碎细胞后应镜检,细胞破碎率不小于90%,并且没有明显的组织小块。
2. 取组织匀浆液转移到1.5 mL 预冷的离心管,冰上放置20min左右,期间取出剧烈震荡2-3 次。再10000 rpm,4℃离心5 min。
3. 取上清转移至新的预冷的离心管中,进行蛋白定量。
4. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
使用注意事项[1]
1. 溶液A在4℃的冰箱冷藏室中保存,如果产生沉淀,可以加热到50℃温浴5 min,使得充分溶解。
2. 充分裂解后溶液是很透明而且不太粘的,如果裂解后溶液比较粘,可以使用超声破碎仪,延长破碎的次数。
3. 裂解液中有较高浓度的去垢剂,不建议使用普通的Bradford 法,但可用BCA 法( C503021)或改良Lowry 法( C504041) 测定蛋白浓度。
4. 使用后,请旋紧瓶盖,防止溶液挥发和与空气的物质发生化学反应。
主要参考文献
[1] 罗旭光 藏好晶 孙鹏 曹锡梅;筛选适合酸中毒小鼠骨骼肌组织蛋白提取的裂解液。《中国组织工程研究》2019年 第14期。
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