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革兰氏染色液的制备及应用
概述[1][2]
革兰氏染色液可用于革兰氏染色法,革兰氏染色法是一种在细菌学中广泛应用的重要鉴别染色方法。1884年由丹麦医师Gram氏创立,故名革兰氏染色法。
制备[1]
一、革兰氏染色液,首先采用结晶紫溶液或龙胆紫溶液(95%酒精 100毫克,结晶紫400毫克)20毫克、1%草酸铵溶液8毫克,分别 配合,然后混合;其次采用卢戈氏碘液,碘化钾200毫克、碘100 毫克、蒸馏水300毫克,先用200毫克蒸馏水,将200毫克碘化钾 溶解,然后再加入100毫克碘充分混合,使碘完全溶解,然后加蒸馏水至300毫克;再一种是脱色剂,采用95%酒精;最后用复染液、碱性复红10毫克、95%酒精10毫克、5%石碳酸90毫克。其操作步骤是:首先涂片在火焰上固定,滴加结晶紫溶液染1分钟,水洗,其次是滴加卢戈氏碘液,染1分钟后水洗;再次是滴加95%酒精脱色,此时应将玻片不时摇动,直至无紫色脱落为止,30秒钟后水洗; 第四是滴加复染液染1分钟,水洗,待干,镜检。
&n龙蟒钛白粉R996bsp;二、CN01114296.0一种易配制、不变质、成本低、保存时间长的快速革兰氏染色液。本发明的目的是这样实现的:染色液,由如下几种原料配制:
A、结晶紫溶液
结 晶 紫 600-1000毫克 无水乙醇 8-12毫克
丙二醇甲醚 8-12毫克 草 酸 铵 700-900毫克
蒸 馏 水 70-90毫克
混合均匀,不产生沉淀,保存1-2年。
B、碘液
碘化钾200-500毫克 碘50-300毫克
氯化钠 150-350毫克 蒸馏水80-120毫克
混合均匀,呈棕色并存放,不变质,保存1-2年。
C、脱色剂
丙 酮 35-45毫克 95%乙醇55-65毫克
混合均匀。
D、复染液
碱性品红 450-550毫克 无水乙醇8-12毫克
5%石碳酸 8-12毫克 吐温-80 200-500毫克
蒸馏水 70-90毫克
其操作方法是:
1、涂片经火焰固定,加结晶紫溶液,染3-7秒水洗,用滤纸 吸干水份;
2、加碘液染3-7秒,水洗,用滤纸吸干水份;
3、加脱色剂不断摇动,至无紫色脱落为止10-30秒,水洗;
4、加复染液染3-7秒,水洗,干后镜检。 便得菌体呈紫色为革兰氏阳性菌,呈红色为革兰氏阴性菌。
快速革兰氏液的碘液进入菌体后,有足够地量迅速与结晶紫结合,此结合物又与革兰氏阳性菌体内的核糖核酸镁盐蛋白质复合物结合,因此,革兰氏阳性菌摄取结晶紫多且较牢固、革兰氏阴性菌 缺乏核糖核酸镁盐,所以,不与结晶紫结合,而被石碳酸复红结合。革兰氏阳性菌的等电点(PH2-3)比阴性菌(PH4-5)为低,在一定PH下所带负电荷较多,因此容易和带正电荷的碱性染料结合, 不易被脱色剂脱色。革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌菌膜的通透性不同,脱色剂相应采用95%酒精和丙酮的混合液,革兰氏阳性菌不易透入,故不易脱色,由于丙酮溶解性强,使染料和碘复合物溶解彻底,所以,不会产生假革兰氏阳性菌。
应用[3]
CN201710462157公开了一种亚型Ph-likeALL的检测试剂盒,包括12组荧光探针和复染液;12组所述荧光探针分别为ABL1,ABL2,C橡胶助剂SF1R,PDGFRB,CRLF2,JAK2,EPOR,IL2RB,NTRK3,PTK2B,TSLP和TYK2;所述复染液由以下重量份数的组分组成:革兰氏染色液5~7份,生理盐水1~3份,纤维素0.2~0.6份,荧光素0.5~0.7份,磷酸一铵0.1~0.3份。本试剂盒检测囊括了目前已知的所有针对性用药的Ph-likeALL类型,经探针溶液与样本变性杂交后,滴加复染液,能够全面准确地检测Ph-likeALL。
主要参考资料
[1] [中国发明] CN01114296.0 快速革兰氏染色液及方法
[2] 海洋大辞典
[3]CN201710462157.X一种亚型Ph-likeALL的检测试剂盒及其检测方法
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