背景^[1-7]

免疫染色洗涤液(10X)可用于免疫荧光(Immunofluorescence,IF)、免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)和免疫细胞化学(Immunocytochemistry,IC)等免疫染色时固定、一抗或二抗孵育后的洗涤。适当洗涤可以降低背景，增强信噪比。使用免疫染色洗涤液目的是使抗体能够充分地进入胞内进行结合反应。

一般用Triton X-100、蛋白酶k等通透液。如Triton X-100可以溶解细胞膜、细胞核膜、细胞器膜上的脂质而使抗体及大分子结构的物质进入胞浆和胞核内，故在细胞免疫组化时尤为推荐使用，这样抗体就能顺利进入胞内与相应抗原结合。在免疫组织化学（>10um厚切片）和免疫细胞化学中一般用Triton X-100 作为细胞通透剂，在膜上打孔。同时也是一种去污剂，一般在PBS中加入后终浓度是0.05%即可，而前者终浓度是0.5%-1%。石蜡切片4um左右可以不通透，因为细胞已经被切开了。

免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。

免疫组化原理：抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来，以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定量的研究。

近年来，随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现，使许多疑难肿瘤得到了明确诊断。在常规肿瘤病理诊断中，5%-10%的病例单靠H.E.染色难以作出明确的形态学诊断。尤其是免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可，其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时，准确率可达50%-75%。免疫染色(immunol staining)包括免疫荧光(immunol fluorescence)、免疫组化(immunol histochemistry)，免疫组化又称免疫细胞化学(immunol cytochemistry)等。

免疫染色实验方法和步骤：

1. 样品准备(Sample preparation)

2. 固定

3. 封闭(Blocking)

4. 一抗孵育(Primary antibody incubation)

5. 二抗孵育(Secondary antibody inucubation)

6. 蛋白检测(Detection of proteins)

应用^[8][9]

免疫染色洗涤液(10X)可用于免疫染色时一抗或二抗孵育后的洗涤。适当的洗涤可以降低背景、增强信噪比。

桥本甲状腺炎(HT)是一种常见的内分泌疾病,女性发病是男性的3-4倍。HT的主要特征为甲状腺功能减退症和甲状腺不对称性肿大。HT的临床诊断依赖于血清甲状腺过氧化物酶(TPO)抗体和／或甲状腺球蛋白(TG)抗体阳性。这些自身抗体所致的损伤主要是由激活补体依赖和／或抗体依赖的细胞毒作用,产生TPO抗体和TG抗体所造成的。

桥本甲状腺炎除了导致甲状腺病变之外,还同一系列非甲状腺的多器官损害相关：例如眼、肝脏、骨、肾脏、结缔组织和皮肤病变。其中有些损害是由自身免疫机制导致的。建立甲状腺和肾脏组织TPO抗体免疫染色的方法。对桥本甲状腺炎患者甲状腺和肾脏组织TPO抗体免疫染色结果进行分析。组织TPO抗体免疫抗氧剂1010染色方法包括：组织固定、脱水、包埋、切片,以及HE染色和免疫荧光(IHF)染色。

实验标本包括：1.甲状腺良性乳头增生组织。2.乳头状甲状腺癌组织。3.桥本甲状腺炎甲状腺组织。4.桥本甲状腺炎肾活检组织。对桥本甲状腺炎患者甲状腺和肾脏组织TPO抗体免疫染色结果进行分析,以便对自身免疫相关的多器官损害采取早期干预措施并降低其发生机率。甲状腺和肾脏组织TPO抗体免疫染色的方法己成功建立,主要包括组织固定、脱水、包埋、切片、HE染色和IHF染色。

桥本甲状腺炎患者的甲状腺组织和肾脏组织TPO抗体染色结果皆为阳性,反映出HT患者中自身免疫相关的多器官损害。因此,在桥本甲状腺炎及其多器官损害的发病机制中,自身免疫因素的核心重要地位得到验证。所以在未来应对桥本甲状腺炎时,激素及免疫抑制治疗可以起到至关重要的作用,同时,患者的多器官损害状况必须得到足够的重视,以避免自身免疫相关性损害的发生。

参考文献

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[9]Sumeet Singh Talwar. 桥本甲状腺炎自身免疫和多器官损害研究：甲状腺和肾脏组织甲状腺过氧化物酶抗体免疫染色的方法建立以及结果分析[D].天津医科大学,2013.