背景及概述^[1]

F12（Ham）液体培养基又叫Ham′s F12培养基，用于细胞培养。保存条件：2-8°C，一年有效。产品成分：含146mg/L L-谷氨酰胺，1802 mg/L D-葡萄糖， 110mg/L丙酮酸钠，1176mg/L碳酸氢钠，pH值7.2-7.4。

应用^[2-3]

一、用于培养人原代肿瘤细胞

目前常用的人肿瘤干细胞分离培养方法多采用无血清悬浮培养法，从细胞株中对含量极少的干细胞进行分离培养或者直接购买干细胞株进行悬浮培养，而通过原代肿瘤细胞贴壁培养的方法较难成功分离培养人肿瘤干细胞。饲养层在细胞培养中的使用情况：①国外有报道使用J2（3T3细胞的一种亚型）细胞作为饲养层进行肿瘤细胞的原代培养，但未提及使用其进行肿瘤干细胞培养。而且，J2细胞在作为饲养层的过程中需要严格控制其浓度与状态，不易操作，且目前在国内购买不到。 ②国外报道，使用J2细胞作为饲养层要配合F培养基进行肿瘤细胞的原代培养。

我们在将J2 细胞更换为BALB3T3细胞并使用F培养基进pvc复合稳定剂行肿瘤细胞的原代培养时发现，在原代细胞贴壁 生长初期，会有很长一段时间的适应期，之后才会进入对数生长期。而使用改良F培养基进行培养，相比于F培养基，培养的人原代肿瘤细胞能够尽快在饲养层脱落之前进入对数生长期，其生长速度与饲养层的脱落速度达到了更好地平衡，原代细胞的生长速度明显高于使用F培养基时原代细胞的生长速度，且可获得更高比例的肿瘤干细胞。

CN201410087758.3提供了一种细胞培养基，以及在培养人原代肿瘤细胞或肿瘤干细胞中的应用。本发明是通过以下技术方案实现的：一种细胞培养基（改良F培养基），其原料配方为：DMEM/High Glucose（DMEM高糖培养基）33.33ml；HAM’S/F-12培养基66.67ml；植物源重组人血清白蛋白（Oryzogen，购自武汉禾元生物科技有限公司）3～5mg/mL；青霉素100U/ml；链霉素100μg/ml；两性霉素B2.5μg/ mL；氢化可的松0.2～0.5μg/ml；胰岛素3～6μg/ml；霍乱毒素B6～10ng/ml；人表皮生长因子EGF9～12ng/ml；腺嘌呤22～25μg/ml；Y-27632（Rho相关的卷曲蛋白激酶抑制剂）7～9μmol/ L。

优选的，所述改良F培养基的原料配方为：DMEM/High Glucose（D环氧漆固化剂MEM高糖培养基） 33.33ml；HAM’S/F-12培养基66.67ml；植物源重组人血清白蛋白（Oryzogen，购自武汉禾元生物科技有限公司）5mg/mL；青霉素100U/ml；链霉素100μg/ml；两性霉素B2.5μg/mL；氢化可的松0.4μg/ml；胰岛素5μg/ml；霍乱毒素B8.4ng/ml；人表皮生长因子EGF10ng/ml；腺嘌呤24 μg/ml；Y-27632（Rho相关的卷曲蛋白激酶抑制剂）7μmol/L。所述细胞培养基可以用于培养人原代肿瘤细胞或肿瘤干细胞。本发明改进了培养基，用于培养人原代肿瘤细胞或肿瘤干细胞时，能更好地促进原代肿瘤细胞的生长，获得更高比例的人肿瘤干细胞。

二、用于一种斑马鱼原代胚胎细胞体外分化为心肌细胞的新方法

CN201510193514.8提供了一种斑马鱼原代胚胎细胞体外分化为心肌细胞的新方法。斑马鱼交配后收集发育至囊胚期的胚胎，经消毒及去绒膜处理后，吹打成单个细胞，再置于明胶包被过的细胞培养容器中用心肌细胞诱导培养液培养24至48小时后得到能自发收缩的心肌细胞。心肌细胞诱导培养液组分为Leibovitz L-15培养基、Dulbecco改良Eagle培养基、Ham's F12培养基、胎牛血清、鱼血清、斑马鱼胚胎粗提物、胰岛素、青霉素和链霉素。通过本发明每诱导1万个原代胚胎细胞可获得200个以上的心肌细胞团，且能保持自发收缩特性20天。本发明可实现经济、快速且高效地筛选对心肌细胞形成和发育有影响的生物大分子或小分子药物。

主要参考资料

[1] F12（Ham）液体培养基说明书

[2] CN201410087758.3细胞培养基及其在培养人原代肿瘤细胞中的应用

[3] CN201510193514.8一种斑马鱼原代胚胎细胞体外分化为心肌细胞的新方法