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珠肽粉的制备方法和应用
【背景及概述】异构烷烃[1][2][4]
在现代社会中,人们承受着由高度发达的复杂科学技术 或剧烈变化着的社会环境带来的各种紧张、不安及应急能力低下等。特别是在国际化的社会中形成了复杂的人际关系也会引起精神紧张。已经有报道说精神紧张会引起各种症状。另外,在疾病的治疗中,例如糖尿病、高血压等疾病的治疗中,精神紧张往往是病情恶化,达不到应有治疗效果的主要原因之一。紧张、不安和应急能力低下影响着人们的生活和健康,引起了广泛的关注和研究,并开始建立了各种评价方法。然而目前作为预防和减轻由紧张引起的精神和身体症状的药物,使用的是化学合成药物,如安定药、抗焦虑药和安眠药等。但是,这些药物会有成瘾性和副作用,故不适合日常使用来防止由紧张引起的精神和身体症状。因此,人们需要一种具有抗紧张作用的、日常可以连续食用的、没有任何安全性问题并能够减轻和防止由紧张引起的精神和身体症状的食品和药物。
珠蛋白(英文名为globin),又称球蛋白,是具有携带氧能力的蛋白质。在脊椎动物体内有两种类型:即存在于血液中的血红蛋白和肌肉中的肌红蛋白。珠肽粉即珠蛋白分解物,也被称为珠蛋白肽,是珠蛋白的深加工产品,主要是利用生物的方法,改造珠蛋白分子为低分子的肽,使其生理和营养功能得到显著改善和提高。珠蛋白分解物中的Val-Val-Tyr-Pro肽具有抑制血中甘油三酸酯浓度的作用,可预防或治疗人或动物的肥胖症、高血脂症及其并发的高血压症和动脉硬化等循环器官类疾病。珠肽粉具有降低处于高血糖状态的受试者血糖水平的作用,可用于预防或治疗由高血糖引起的疾病,还具有抑制处于高胆固醇状态或该前阶段的患者的胆固醇再上升的作用,可用于预防或治疗由于胆固醇再上升导致的高胆固醇状态引起的病态或疾患,例如高胆固醇血症、动脉硬化症等。除此之外,还有报道称珠肽粉 或Val-Val-Tyr-Pro肽具有降血压作用。以上可以看出,Val-Val-Tyr-Pro肽作为珠肽粉的主要活性成分之一,具有各种生理活性。
【制备方法】[1][4]
方法1:向100kg新鲜的牛红细胞(其中珠蛋白含量为85%)中加250升水, 进行充分的溶血。用磷酸将pH调节至3.8后,将2.6×107单位来自黑曲霉的酸性蛋白酶加入到溶液中,在50℃下反应2小时。再加入磷酸将pH调节至2.8后,在50℃下反应2小时。反应后,反应溶液在80℃下加热30分钟终止反应。此后,将氢氧化 钙的悬浮水溶液加入至反应溶液中,将pH调节至6.5。然后,加入10kg 硅藻士,混合物用压滤器过滤。将得到的滤液喷雾干燥,从而产生24kg 粉末状珠肽粉。
方法2:向100kg新鲜的牛红细胞(其中珠蛋白含量为85%)中加250升水, 进行充分的溶血。用磷酸将pH调节至5.8后,将1.5×109单位来自黑曲 霉的酸性蛋白酶加入到溶液中,在25℃下反应0.5小时。再加入磷酸将pH调节至4.2后,在25℃下反应0.5小时。反应后,反应溶液在80℃下加热30分钟终止反应。此后,将氢氧化 钙的悬浮水溶液加入至反应溶液中,将pH调节至6.5。然后,加入10kg 硅藻士,混合物用压滤器过滤。将得到的滤液喷雾干燥,从而产生24.8kg 粉末状珠肽粉。
方法3:将抗凝鸭血经过100目筛网过滤除杂,再经3000 r/min 离心10min,取下层红血球沉淀。将沉淀经过胶体磨破碎,再用200目筛网滤除残余的细胞物质。将滤过物置于90℃水浴锅变性30min后进行酶解;加酶量设置0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%等5个梯度,其它酶解参数为:酶解时间3.5h,料液比1:8,ph 值9,酶解温度55℃。酶解完成后,调节phH值至4.5,在5000 r/min离心15min,取沉淀。用去离子水冲洗、离心3次,取沉淀冷冻干燥30h后测血红素得率。收集血红素得率较高组的离心上清液及水洗液,过DL纳滤膜,加入1/3 体积纯水洗浓缩液进行脱盐。浓缩液冷冻干燥30h后测定珠蛋白得率。经过膜处理后分离纯化的结果如下表:
离心上清液及水洗液中总共含蛋白总量为1.1675 kg,过膜后浓缩液中含蛋白0.71kg,滤液中含蛋白0.14kg,过膜损失蛋白约0.3kg,经干燥后得到珠蛋白肽的纯度为66.2%,收率为54%。
【应用】[1][4][5]
1. 珠蛋白肽对早期断奶仔猪生长性能和血液指标的影响
将120 35 日龄的“长×大”二元去势公猪随机分成3组,分别为基础日粮组、基础日粮+0.5%小肽组、基础日粮+1.0%小肽组,每组设4个重复,每个重复10头仔猪,试验期28d,研究珠蛋白肽对早期断奶仔猪生长性能和血液指标的影响。结果表明:与对照组相比,0.5%小肽组平均日增重提高了10.9%(P<0.05),腹泻率降低52.1%(P<0.05);IgG、总蛋白、球蛋白、谷丙转氨酶分别提高了59.1%、19.8%、29.1%、49.2%(P<0.05),尿素氮浓度降低20.1%(P>0.05)。以上结果显示,珠蛋白肽能提高早期断奶仔猪生长性能,增强机体的免疫机能。
2. 珠蛋白肽对血管紧张素转化酶的抑制活性
研究发现,猪血中的珠蛋白酶解产物具有较高的ACE抑制活性,具有无毒副作用和对正常血压无影响的优点,现被广泛用于功能食品及食品添加剂,长期服用可以达到预防、控制、缓解、辅助治疗高血压的目的。
【主要参考资料】
[1] 香川恭一;徐新良.一种含VVYP肽的珠肽粉的制备方法.CN101633945,申请日 2009-08-20
[2] 武艳军, 江国永, 潘勇, 等. 珠蛋白肽对早期断奶仔猪生长性能和血液指标的影响[J]. 饲料工业, 2010, 31(3): 23-25.
[3] 吴伟伟, 于伟, 江国永, 等. 高效液相色谱法测定珠蛋白肽对血管紧张素转化酶的抑制活性[J]. 饲料与畜牧: 新饲料, 2012 (1): 46-48.
[4] 江国永, 蒋兴龙, 周霞云, 等. 珠蛋白肽对断奶仔猪生长性能和腹泻改善的影响[J]. 饲料与畜牧: 新饲料, 2014 (5): 50-51.
[5] 李豪, 赵贞卓,珠光颜料 蔡君, 等. 酶解结合膜分离技术提取鸭血血红素及珠蛋白肽工艺研究[J]. 绿色科技, 2015 (3): 219-220.
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