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IgG抗体纯化树脂的介绍
概述[1]
IgG纯化树脂是采用平均粒径为45-165 μm的4%高度交联琼脂糖凝胶经过溴化氰活化后,再将人的IgG共价连接而成,它可以 用来纯化和抗体结合的各种蛋白,例如Protein A、Protein G和分泌型表达载体pEZ淬火剂Z18所表达的含有两个人工合成的Z抗体结合区的融合蛋白,提供的该IgG纯化树脂为悬浮液,纯化树脂含量为50%。
特点[1]
1. 配体为人IgG,载量6-10 mg人IgG /mL纯化树脂。
2. 结合量为大于2 mg Protein A/mL纯化树脂。
3. pH范围为3-10,保存温度2-8°C,含有20%的乙醇。
4. 刚性强,流速快(300 cm/h、100 kpa)。
5. 基团脱落少,结合特异性强,载量高,寿命长。
运输和保存条件[1]
常温运输,4°C保存,保质期两年,不可冻存。
实验前准备[1]
推荐使用的缓冲液:
结合液:Tris-saline Tween 20 (TST): 50 mM Tris buffer、 pH 7.6、150 mM NaCl and 0.05% Tween 20。
洗脱液:0.5 M CHCOOH (HAc) 用 CHCOONH4 调节 pH 到 3.4,或 0.1 M Glycine-HCl pH 3.0。 洗涤液:5 mM NH4Ac, pH 5.0
操作步骤
1. 用至少5倍柱床体积的TST清洗IgG纯化树脂,以便完全去除残留的含有乙醇的保存液。 2. 用至少2倍柱床体积的以下溶液依次平衡IgG纯化树脂一次,1) 0.5 M HAc, pH 3.4;2) TST; 3) 0.5 M HAc,pH 3.4; 最后再用2倍柱床体积的TST平衡IgG纯化树脂两次。
3. 将花王抗静电剂所要纯化的含有目的蛋白的清澈的细菌裂解液、细胞上清或培养基的pH调整到中性,再将样品加入含有IgG纯化树脂 纯化柱中。
4. 静止5 min后,再用5倍柱床体积的TST清洗IgG,纯化树脂两次;再用2倍柱床体积的5 mM NH4Ac pH 5.0清洗两次。
5. 用0.5 M HAc pH 3.4或者0.1 M Glycine-HCl pH 3.0洗脱收集目的蛋白,同时1 M的Tris-HCl(pH 9.0左右)调节pH到中 性。 6. 采用BCA法(C503021)或(C503061)定量确定蛋白浓度,采用SDS-PAGE确定蛋白的大致纯度。
参考文献
[1]IgG抗体纯化树脂产品介绍
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